Secuencia de adn promotora de la expresion de genes

Reivindicaciones:

Una secuencia promotora de la expresión de genes que puede ser utilizada para proteínas recombinadas tanto en microorganismos gram positivos como gramnegativos. La secuencia promotora reivindicada tiene una fortaleza superior a una secuencia promotora conocida como es la tac y resulta en un métodoeficiente para la producción en gran escala de proteínas recombinantes. Otra característica importante de esta secuencia promotora es que puede expresargenes utilizando ARN polimerasa de T&. Esto otorga a la secuencia promotora cierta independencia con relación al huésped si es cotransformado con el gende la ARN polimerasa de T7. Comprende la construcción de un vector con un gen sin su promotor original. En lugar de la secuencia promotora original secoloca un sitio de clonado múltiple. Como reporter se utiliza el gen de la b-lactamasa, debido a que posee un fenotipo fácilmente detectable y porque suproducto es una proteína que se ubica en el periplasma de la bacteria.Posteriormente, se clonan y analizan las secuencias promotoras obtenidasmediante el armado de un vector con un gen reporter sin su promotor original. El vector construido se denomina pACPR33 y el gen reporter que se utiliza es elcorresponlcorrespondiente a la b-lactamasa. El funcionamiento del vector se verifica por el clonado del tac (promotor sintético lac-trp) en su sitio de clonadomúltiple. El vector pACPR33 se utiliza para clonar promotores en E. coli a partir de secuencias aisladas de una digestión exhaustiva del ADN de fagos deStaphylococcus aureus. Los clones obtenidos mediante este procedimiento se analizan para determinar su fortaleza mediante ensayos de actividad deb-lactamasa por un método biológico (CIM) y un método iodométrico. El clon con mayor fortaleza, denominado clon 212, se secuencia y subfragmenta por el método

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